MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACIÓN RITCHIE

FUNDAMENTO:

se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.

una de las ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar  las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

MATERIAL Y EQUPO.

·         centrifuga

·         tubos de ensaye cónico de 15 ml

·         gasa cortada en cuadros

·         embudo de polietileno

·         vasos de precipitado de 50ml

·         aplacadores de madera

·         pipeta Pasteur

·         cubreobjetos

·         microscopio

Soluciones:

·         soluc. Salina isotónica

·         soluc. De formaldehido al 10%

·         éter

METODO

a)  Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. de la materia fecal en el vaso de precipitado, se añaden 10 ml de solución salina y se homogeniza.

b) se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el filtrado en el tubo cónico.

c) Se centrifuga la suspensión durante 2 min. a 2000 rpm.

d) Se decanta el sobrenadante y se re suspende el sedimento con solución salina, centrifugando, decantando y re suspendiendo 2 veces más.

e) Al último sedimento se agregan 10 ml de solución de formaldehido al 10%, se mezcla y se deja reposar durante  10 mi.

f) Se añaden después de 5 ml de éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan energéticamente durante 30 segundos.

g) se centrifuga durante 2 min a 2000 rpm.

h) Después de centrifugar se observan 4 capas:

·         éter en la superficial,

·         un tapón de restos fecales,        

·         formaldehido,

·         sedimento con el fondo del tubo, contenido lo elementos parasitarios.

i) Se decanta el sobrenadante

j) Se introduce la pipeta Pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.

k) se le añade una gota de Lugo y con uno de los ángulos del cubreobjetos, se homogeniza, cubriéndolo con el mismo.

j) Se observa la preparación en el microscopio con objetivos de 10X y 40X

 

Conclusion: 

 se encontraron fibras de tejido y, restos de comida y algunas grasas.

Como puede verse, el resultado para huevecillos de parásitos resulto negativo.

“MÉTODO DE CONCENTRACIÓN – FLOTACIÓN DE FAUST BIS”

Este método se utiliza solución Zn , cuya densidad especifica es de 1.180(33%) ;que conforma un medio de densidad más alta que la de los huevos  : Necátor 1.055 Triccefalo 1.150 , Ascaris fertil1.110 y facilita que los huevos livianos de estos helmintos , con menor peso especifico que la solución , se concentren y floten .

La concentración adecuada es la que se usa como reactivo una solución acuso de Zn al 33% con una densidad 1.180. El agua utilizada diluye y lava la materia fecal. El filtrado con gasa doblada y evita que los detritos gruesos traspasen las paredes, la centrifugación enriquece en delgada película la superficie del liquido centrifugado con los huevos livianos de algunos helmintos.

TECICA:

·        

Mezclar bien una porción de materia fecal para prepara una superficie en 10 partes de agua destilada.

·        Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en cuatro, sobre un tubo de centrifuga, ayudándose con un embudo pequeño.

·        Centrifugar el filtrado a 2500rpm por 1m .

·        

Decantar el liquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la media anterior centrifugar nuevamente .Resuspender el sedimento.

·        Repetir el procedimiento 2 veces hasta que el líquido sobrenadante esté listo.

·        Decantar nuevamente el líquido sobrenadante remplazándolo por igual cantidad de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solución con el sedimento .Centrifugar durante 1mnto a 1500 rpm.

·        Tomar 3-4 gotas de las partículas que flotan en la superficie del líquido.  Colocarlos en un porta-objetos y mezclar conde 1-2 gotas de yodo Lugol.

·        Examinar al microscopio y reporte sus resultados.

 Conclusión

En esta practica los resultados que obtuvimos de la muestra fueron unos pocos huevecillos y restos de comida ; ya que esta este tipo de practica ayuda a determinar el diagnostico de ciertos protozoarios.

“MÉTODO DE CONCENTRACIÓN – FLOTACIÓN DE FAUST”

Este método se utiliza solución Zn, cuya densidad especifica es de 1.180(33%) ; que conforma un medio de densidad mas alta que la de los huevos  : Necátor 1.055 Triccefalo 1.150 , Ascaris fertil1.110 y facilita que los huevos livianos de estos helmintos , con menor peso especifico que la solución , se concentren y floten .

La concentración adecuada es la que se usa como reactivo una solución acuso de Zn al 33% con una densidad 1.180 . El agua utilizada diluye y  lava la materia fecal.  El filtrado con gasa doblada y evita que los detritos gruesos traspasen las paredes, la centrifugación enriquece en delgada pelicula la superficie del liquido centrifugado con los huevos livianos de algunos helmintos.

TECICA:

·        Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua destilada.

·        Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en cuatro, sobre un tubo de centrifuga, ayudándose con un embudo pequeño.

·        Centrifugar el filtrado a 2500rpm por 1m.  

·        Decantar el liquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la media anterior centrifugar nuevamente. Resuspender el sedimento.

·        Repetir el procedimiento 2 veces hasta que el liquido sobrenadante esté listo.

·        Decantar nuevamente el líquido sobrenadante remplazándolo por igual cantidad de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solución con el sedimento. Centrifugar durante 1mnto a 1500 rpm.

·        Tomar 3-4 gotas de las partículas que flotan en la superficie del líquido .Colocarlos en un porta-objetos y mezclar conde 1-2 gotas de yodo Lugol.

·        Examinar al microscopio y reporte sus resultados.

CONCLUSIÓN 

 Las técnicas de flotación, sedimentación y conteo son algunas de los métodos  utilizados para la determinación de parásitos intestinales como parte del diagnóstico de protozoarios.

En este caso lo que se observo en la muestra  fueron huevecillos y algunos restos de comida .

Dr. Vicente Martines Fragoso 

Alumna. Leticia Ortiz .

Mixquiahuala de Juárez Hgo. a 29 de Agosto del 2013.

IDENTIFICA MICROORGANISMOS CON BASE EN TÉCNICAS PARASITÓLOGAS.

Practica No. 1

“MÉTODO C.P.S. DIRECTO O EN FRESCO”

Introducción: Como sabemos uno de los primeros microscopistas fue Antón Van Leewenhoek y a mediados del siglo XVII fue el primero en utilizar este método al observar directamente en sus propias heces fecales, trofozoítos de Guardialamblia.                                                                                                   

El método que necesitas es menos equipo y el más sencillo de realizar, corresponde a las preparaciones húmedas, que se hacen directamente con muestras de heces. Para las preparaciones directas de heces frescas o no preservadas, el formol sirve de diluyente.

Las preparacio0nes no teñidas son de especial valor para el estudio de parásitos vivos, como trofozoítos de protozoarios móviles, huevos helmintos y larvas de nematodos . El lugol se emplea principalmente para la búsqueda e identificación de quistes y larvas, con base a sus características. La mezcla normal en el tracto intestinal por lo general no asegura  una distribución uniforme de trofozoítos de protozoarios móviles, huevos de helmintos y larvas nematodos.

Sin embargo el examen de materia fecal directo o en fresco puede revelar o no parásitos, dependiendo de la intensidad de la infección.

FUNDAMENTO:

La solución salina isotónica de las condiciones adecuadas para que las células se mantengan viva. El medio ideal para todo tipo de parasito que puede encontrarse en las muestras de heces, en cualquier etapa de su desarrollo es la solución salina fisiológica, y el lugol en la práctica ha demostrado su eficacia para la tinción e identificación de parásitos intestinales.

• Tipo de Muestra: -2 Muestras de heces fecales.

MATERIAL:

4 Aplicadores de madera.

4 Portaobjetos de 25x76 mm

4 Cubreobjetos.

Reactivos

Solución salina isotónica

Lugol parasitológico.

Equipo:

2 Microscopios.

TÉCNICA 
En un portaobjetos coloca una gota de solución salina isotónica.

2.  Con la punta del aplicador toma una pequeña muestra de aprox. de 1 a 4 mg de heces, en muestras con moco y sangre elegir esta parte para estudiar.

3. Mezclar procurando hacer una suspensión en preparación delgada y no un frotis.

4.   Quitar de la suspensión fibras y otros fragmentos grandes.

5.   Colocar el cubreobjetos lentamente procurando no dejar burbujas.

6.   Examinar al microscópico en forma sistemática a seco débil y a seco fuerte.

7.   Repetir la operación con una gota de lugol en lugar de la solución salina.

REPORTE 

En la primera muestra se observó fibras normales y restos de vegetales; en la segunda muestra lo que se observo fueron Huevos de Ascaris lumbricoides.

 CONCLUSIÓN

Esta práctica nos sirvió para poder observar la presencia de quistes o  trofozoítos de un parásito o así mismo lo que contiene una muestra de heces fecales como los restos de vegetales o de alimentos que el paciente consumió.

Centro de Bachillerato Tecnológico industrial y de servicios No. 199. 

Alumna . Leticia Ortiz Aguilar 

Identifica Microorganismos Con Base En Técnicas Parasitólogicas.

Laboratorio Clínico 

Dr. Vicente Martínez Fragoso.  

SOLUCIONES VALORADAS: EMPÍRICAS Y VALORADAS 

OBJETIVO: Que los  alumnos observen las diferencias entre las soluciones empíricas y valoradas.

EXPERIMENTO 1: Soluciones Empíricas 

Material

• Vaso de precipitados
• Termómetro 
• Agitador de vidrio
• Soporte con anillo de hierro
• Rejilla de asbesto
• Pinzas para crisol
• Baño maría
• Probeta de 50 ml
• Mechero 

Sustancias 

• Cloruro de sodio 
• Agua destilada
• Hielo 

PROCEDIMIENTO:

a) Mida 50 ml de agua destilada y coloquen la  en el vaso de precipitados; agregue unos cuantos gramos de sal y agite. 

b) Con este mismo sistema, vierta poco a poco suficiente cloruro hasta que no pueda disolverse mas; agite y registre la temperatura (t/1).

c) agregue un exceso de sal y caliente hasta que la disolución se complete, agite si es necesario. Cuando todo el soluto se halla disuelto, mida la temperatura (t/2).

d) Deje enfriar el vaso con el contenido y  observar lo que ocurre en el fondo; coloque en un baño de hielo.

EXPERIMENTO 2: Soluciones Valoradas

Material 

• Matraz aforado
• Pipeta graduada 
• Pizeta
• Vaso de precipitados
• Balanza granataria
• Agitador

Sustancias 

• Ácido clorhídrico
• Agua destilada
• Hidróxido de sodio 

PROCEDIMIENTO 

a) En este experimento prepara 100 ml de una solución 0.1 M de ácido clorhídrico, por lo que debe calcular el volumen de ácido necesario, tomando en cuenta para realizar este calculo la pureza, tanto como la densidad.

b) Una vez que se ha calculado el volumen necesario, para preparar la solución  mida este con una pipeta y páselo con cuidado a un matraz aforado, que contenga aproximadamente 20 ml de agua destilada, agite, y con ayuda de una pizeta agregue mas agua destilada hasta la marca del aforo.

c) Mueva varias veces asta disolver el soluto y etiquete el matraz con la formula y concentración de la solución.

d) Ahora preparen una solución valorada en donde el soluto es el sólido, serán 100 ml de una solución 0.1 N de hidróxido de sodio.

e) Pese  con precisión la masa que calculó y disuelva en un vaso de precipitados, con un pequeño volumen de agua destilada, agréguela al matraz aforado; agite para disolver completamente el soluto, después  añada agua suficiente, con la pizeta, hasta llegar al aforo. continué moviendo varias veces y etiquete con el concentrado de la solución y la formula del soluto.

conclusión: por medio de los experimentos realizados anteriormente aprendimos a diferenciar una solución valorada y una solución empírica, así como tambien observamos las características que cada solución tiene en diferentes estados de la materia.

Laboratorio Clínico 2 DM

¿cómo podemos preparar soluciones valoradas?

En esta practica conocerás las partes de una solución  e identificaremos las soluciones valoradas mas comunes así como su preparación.

MATERIAL:

• 1 Matraz aforado de 100 ml cloruro de sodio                
• 3 Matraces Erlenmeyer Hidróxido de sodio 
• 1 Balanza granataria Azúcar
• 1 Bureta de 50 ml Solución 0.1 N DE NaOH
• 1 Probeta de 50 ml Indicador de Fenolftaleína               
• 1 Vaso precipitados de 100 ml Agua destilada 
• 3 Vidrios de Reloj
• 1 Embudo chico
• 1 Agitador de vidrio 

PROCEDIMIENTO 

1. En un vidrio de reloj pesar 1 gramo de cloruro de sodio y medir con la probeta 99 ml de agua de la llave (99 gramos). Agregar estas sustancias al vaso de precipitado y disolver la sal en el agua, empleando el agitador de vidrio.

2. En un vidrio de reloj pesar 0.4 gramos de NaOH e introducir dentro de un matraz aforado de 100 ml. Agregar agua destilada hasta el aforo y disolver completamente el hidróxido.                                                                               a) En tres matraces Erlenmeyer agregar a cada uno de ellos 10 ml de la solución preparada de hidróxido de sodio y 4 gotas de indicador de Fenolftaleina.

b) En una bureta de 50 ml poner una solución 0.1 N de HCL.

c) Con la bureta adicionar la solución del ácido a cada uno de los matraces del inciso asta que el color desaparezca y la solución se ponga transparente.

3. En un vidrio de reloj pesar 3.4 gramos  de azúcar de mesa (sacarosa. formula C12H 22-11) y ponerlos en el matraz aforado de 100 ml y agregar agua de la llave hasta el aforo y disolver completamente la sacarosa.

                                                  CONCLUSIÓN               

                Por medio de los experimentos realizados aprendimos los diferentes tipos de soluciones y los procedimientos para reconocerlos.